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超速离心沉淀法浓缩与纯化慢病毒的技术

2017/1/4 16:42:03      点击:
1. 取6个Ultra-clear SW28离心管,用70%乙醇消毒后,放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
3. 取一支10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部,缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地,将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管,对剩下3管进行同样处理。
4. 用PBS调整各管的重量,使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
5. 按次序将所有6个离心管放入超速离心机转头中。
6. 4℃,25,000 rpm. (82,700g) 离心2小时。
7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清,将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中,盖上盖子。
10. 在4℃溶解2小时,每隔20分钟轻轻震荡。
11. 4℃,500g离心1分钟,使溶液集中于管底。
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份,保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。
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