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禽流感病毒通用荧光RT- PCR检测方法

2016/6/2 18:23:36      点击:

禽流感病毒通用荧光RT- PCR检测的操作方法,适用于活禽及其产品中禽流感病毒的检验。

样品采集
活禽取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:取咽喉拭子时将拭子深人喉头口及上颚裂来回刮3次一5次取咽喉分泌液;取泄殖腔拭子时将拭子深人泄殖腔转一圈并沾取少量粪便;将拭子一并放人盛有1.0mLPBS的1.5mL Eppendorf管中,加盖、编号。

肌肉或组织脏器?待检样品装人一次性塑料袋或其他灭菌容器,编号,送实验室。

血清、血浆?用无菌注射器直接吸取至无菌印pendorf管中,编号备用。

样品贮运
样品采集后,放人密闭的塑料袋内(一个采样点的样品,放一个塑料袋),于保温箱中加冰、密封,送实验室。

样品制备
咽喉、泄殖腔拭子样品在混匀器上充分混合后,用高压灭菌镊子将拭子中的液体挤出,室温放 置30min,取上清液转人无菌的1.5m L印pendorf管中,编号备用样品存放制备的样本在2 `C -8`C条件下保存应不超过24h,若需长期保存应置一70`C以下,但应避免反复冻融(冻融不超过三次)。

试剂准备

在反应混合物配制区进行从试剂盒中取出相应的荧光RT-PCR反应液,Taq酶,在室温下融化后,2000r/min低速离心机离心5s。设所需荧光RT-PCR检测总数为n,其中n为被检样品、为阳性对照与阴性对照的和。

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