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枯草杆菌的离心培养方法

2017/3/7 21:36:38      点击:

①取受体菌接种于BY培养液中,37℃培养到对数生长早中期。此时OD620应在0.4左右,培养时间约为4~5小时。

②将培养后的菌液离心,弃去上清液,再用生长培养基(GM液)洗菌一次,然后将菌体细胞重新悬浮在与BY培养液等体积的GM液中。37℃继续振荡培养到对数生长后期。此时OD620应在0.6~0.9,培养时间约为3~5小时。

③以1:10的比例将GM液中培养的菌液稀释于转化培养基(TM液)中。即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中,在20×150mm的试管中,37℃振荡培养90分钟。

④加入供体质粒,至最终浓度1ug/ml,于20×150mm的试管中,37℃振荡培养30分钟。

⑤取200ul涂布抗性选择平板,37℃培养48小时。

【培养基配方】

A.        BY培养基:牛肉膏5g,酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,葡萄糖5g,蒸馏水1000ml,pH7.5。

B.        1×最低盐溶液:K2HPO4 14g(K2HPO4•3H2O 18.34g),K2HPO4 6g,(NH4)2SO4 2g,柠檬酸钠(Na3C6H5O7•2H2O)1g,MgSO4•7H2O 0.2g,在蒸馏水中依次溶解,加水至1000ml。

C.        L- trp溶液,2mg/ml,贮于棕色瓶内,用黑纸包裹。(过滤灭菌)

D.        生长培养基:GM,使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml,1M硫酸镁0.5ml,50%葡萄糖1ml,5%水解酪蛋白0.4ml,10%酵母汁1ml,L-trp 50ug/ml。

E.        转化培养基:TM,使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml,1M硫酸镁0.5ml,50%葡萄糖1ml,5%水解酪蛋白0.2ml,L-trp 5ug/ml。

其中 50% 葡萄糖 过滤灭菌   5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高温灭菌至于载体你可以试试 pAX01这是一个适用于芽孢杆菌属的过表达载体

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